豬瘟病毒（CSFV）抗體ELISA檢測試劑盒

發布時間：2014-01-23 11:29:42

    一、產品類型：阻斷ELISA試劑盒，檢測豬瘟病毒抗體。
    二、產品介紹：
    豬瘟病毒抗體ELISA檢測試劑盒是建立在多重誘捕阻斷ELISA技術上，使用了CSFV的E2蛋白和單克隆抗體。用於檢測和評估豬群免疫後CSFV中和抗體水平。
    三、實驗原理：
    豬瘟病毒抗體阻斷ELISA是將經過免疫親和技術純化的重組E2糖蛋白包被在酶標板上，如果樣品中存在抗E2糖蛋白的抗體，那麽在加入辣根過氧化物酶結合的抗E2糖蛋白單克隆抗體以及顯色底物後，顏色將不會加深。顏色的OD值和血清樣品中抗E2糖蛋白特異性抗體的量呈負相關。樣品的OD值同陽性對照以及陰性對照比較後得到血清樣品中抗體的百分比值。
    四、特點：
    豬瘟病毒抗體ELISA檢測試劑盒是用來檢測豬血清中抗E2糖蛋白的抗體，可以排除其他瘟病毒抗體比如牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）抗體的交叉反應。該方法同中和酶聯分析法（NPLA）有較好的相關性
    五、試劑盒組成：
    名稱                    數量
    1、包被板                  Coated Plate 2塊
    2、10倍洗液               10×Washing Buffer 100毫升
    3、樣品稀釋液              Dilution Buffer 60毫升
    4、酶標抗體                HRP-Antibodies 40毫升
    5、陽性對照血清            Positive Control  1.0毫升
    6、陰性對照血清            Negative Control 1.0毫升
    7、TMB底物顯色液         TMB Substrate 30毫升
    8、終止液                  Stop Solution 20毫升
    9、試劑盒操作說明書        Instruction Manual 1份   
    六、操作步驟：
    1、實驗準備
    a 使用前所有試劑盒組份都必須恢複到室溫，試劑應輕輕旋轉或振蕩均勻；
    b 稀釋【10倍洗液】：如20mL洗液，加入180mL去離子水混勻，備用；
    c 取出【包被板】，在記錄表上記錄陰、陽性對照品和樣品的加樣位置。
    2、加樣
    a 【包被板】每孔加入50 μL【樣品稀釋液】；
    b 加入【陽性對照血清】、【陰性對照血清】和待檢血清各50 μL。其中【陽性對照血清】、【陰性對照血清】各加2孔，每份待檢血清加1孔；
    c 貼上封板膜，22-27 ℃孵育1小時或2-4℃過夜。
    3、加【酶標抗體】
    a 小心揭掉封板膜，棄去各孔中液體，拍淨。每孔加洗液300 μL，洗3次，最後在吸水紙上拍淨；
    b 每孔加入【酶標抗體】100 μL，22-27 ℃孵育30分鍾。
    4、加【TMB底物顯色液】
    a 棄去各孔中液體，拍淨。每孔加洗液300 μL，洗3次，最後在吸水紙上拍淨；
    b 每孔加入【TMB底物顯色液】100 μL，22-27 ℃避光孵育15分鍾。
    5、終止反應和讀數
    每孔加入【終止液】50 μL，輕振混勻，置酶標儀450 nm波長處測定各孔OD450nm值。
    七、結果判定：
    1、實驗結果同時符合下列條件，方為有效：
    【陰性對照血清】OD450nm平均值＞0.5
    【陽性對照血清】OD450nm平均值＜0.2
    2、計算方法
    計算待檢樣品CSFV抗體阻斷率：
    樣品阻斷率（%PC）=【陰性對照血清】OD450nm平均值－樣品OD450nm值 ×100%
       【陰性對照血清】OD450nm平均值－【陽性對照血清】OD450nm平均值 
    3、判定標準
    a 樣品%PC＜40%，判為陰性；
    樣品%PC≥40%，判為陽性；
    b 如果結果可疑，檢查樣品有無汙染或重檢；
    c 如果重檢結果依然可疑，應結合豬場流行病學情況，重新采樣並檢測。