豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)抗體ELISA檢測試劑盒

發布時間：2014-01-06 15:19:20

包裝規格：480樣/KIT；192樣/KIT

一、產品介紹：

    豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)抗體ELISA檢測試劑盒用重組PRRSV的N蛋白包被，用來檢測血清中N蛋白抗體。在豬群監測中，可為預防和控製該疾病提供有效的信息。

二、實驗原理：

豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)抗體ELISA檢測試劑盒是通過間接ELISA檢測血清中PRRSV抗體，用重組N蛋白包被，酶標抗體為豬抗IgG。操作步驟為樣品稀釋，加樣，孵育，洗滌；再加入酶標抗體，如果血清中含有N蛋白抗體，則抗體會與酶標板上包被的重組N蛋白結合，酶標抗體也會與血清中N蛋白抗體結合，加入底物後，顏色將會變深。如果血清中沒有N蛋白抗體，顏色變化會很小，或不發生變化。

三、試劑盒內容：

四、采樣標準：

1、盡可能采集新鮮血清樣品；

2、采集全血，分離出血清後，將血清存放在-20 ℃冰箱，以備使用；

3、不要使用溶血或汙染嚴重的樣品；

4、大中型豬場監測中，每群（後備母豬、經產母豬、斷奶仔豬等）采樣不少於35頭份。

五、注意事項：

1、使用之前請仔細閱讀操作說明；

2、試劑盒存儲條件：4-8 ℃。

六、實驗前準備：

1、稀釋10倍洗液：如20 mL洗液，加入180 mL去離子水混勻，備用；

2、TMB底物顯色液：使用前請恢複到室溫，低溫可能導致不顯色。

七、樣品稀釋：

1、準備好1 mL樣品稀釋板或微量試管；

2、100倍稀釋樣品：分步稀釋，先加入90 μL樣品稀釋液，再加入10 μL的樣品血清，混合均勻；再取90 μL樣品稀釋液，加入10 μL經過第一步稀釋的血清，混合均勻即可。（陽性對照血清和陰性對照血清不要稀釋）

八、操作步驟：

1、實驗前準備及加樣

a使用前所有試劑盒組份都必須恢複到室溫，試劑應輕輕旋轉或振蕩均勻；

b取出包被板，標記好樣品和陰、陽性對照的位置；（陰陽性對照各做兩孔）

c每孔分別加入100 μL陽性、陰性對照和稀釋後的樣品，貼上封板膜，22-27 ℃孵育30 min。

2、洗板及加試劑

a小心揭去封板膜，棄去各孔中液體，拍淨。每孔加滿洗液300 μL，洗3次。最後在吸水紙上拍淨；

b每孔加入酶標抗體100 μL，置22-27 ℃孵育30 min；

c重複a，洗5-6次；

d每孔加入TMB底物顯色液100 μL，22-27 ℃避光孵育15 min。

3、讀數

每孔加入終止液50 μL，置酶標儀450 nm波長處測定各OD450值。

九、結果判定

1、實驗結果同時符合下列條件，方為有效：

陽性值≥0.5               陰性值≤0.3

2、判定標準：

S/P值的計算方程式：

S/P=【樣品值-陰性值】/【陽性值-陰性值】

S/P值≥0.4   判為陽性；

S/P值＜0.3   判為陰性；

0.3≤S/P值＜0.4   可疑。

注：1 檢測結果不能區分感染陽性還是免疫陽性；

2 如果檢測結果為可疑，請一個月後進行再次檢測；

3 如果有陽性結果異常的血清樣品，計算該樣品S/P平均值，有助於提供更多血清學分析信息。